细胞代谢流

一、标记方法

1、设置分组：每组设置 6 只小鼠进行标记+1 只无标记的对照（如果动物只数有 限，可以设置 5 只小鼠进行标记+1 只无标记的对照）

2、同位素标记：选择 ¹³C 全标葡萄糖作为示踪剂，其能够在代谢过程中被逐步代谢，使用渗透泵通过灌胃/静脉注射的方式将 ¹³C 全标葡萄糖引入小鼠体内。

（注：配置的同位素浓度为血糖浓度的 1/5-1/10，小鼠空腹血糖浓度为 4.0 - 7.0 mmol/L）

3、样本采集：根据关注的代谢途径，标记一定时间，在注射 ¹³C 全标葡萄糖后的 一定时间内进行采样，取小鼠组织（样本量 50mg）。用预冷的生理盐水冲洗干净，吸干表面水分，立即放入液氮中冷冻保存。

二、标记时间：

对于小鼠同位素示踪技术，标记方式主要是灌胃和尾静脉注射。

若标记的是 ¹³C-glucose，根据小鼠的体重决定灌胃的葡萄糖浓度，浓度的范围为 1-1.5 g/kg（kg 为小鼠的体重）；若选择尾静脉注射，则注射的量为 1-1.2 g/kg （kg 为小鼠的体重）。 由于小鼠的月龄、性别、体重存在差异，需要根据小鼠的实际情况进行标记。

三、同位素示踪剂的配制：

将 ¹³C 全标葡萄糖溶解于 生理盐水 中（配置的同位素浓度为 血糖浓度的 1/5-1/10），使用无菌过滤器对配制好的葡萄糖同位素示踪剂进行过 滤，以去除可能存在的杂质和微生物，确保溶液的无菌性。一般可选用孔径为 0.22 微米的滤膜进行过滤。